極敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒

極敏型 ecl化學(xué)發(fā)光底物試劑盒
ultra-sensitive enhanced chemiluminescence substrate kit
試劑盒組成：
貨號
組份
數(shù)量
ecl-f-100
a 液
50ml
b 液
50ml
說明書
1 份
ecl-f-500
a 液
250ml
b 液
250ml
說明書
1 份
儲存：建議置于4 ºc避光保存，一年穩(wěn)定。
一、產(chǎn)品簡介：
本試劑盒是化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸，靈敏度高，背景低，檢測靈敏度可達(dá)低飛克(femtogram)級乃至飛克級以下，適用于檢測極痕量蛋白或核酸。發(fā)光信號持續(xù)時間較長，半小時以后仍可維持75%的發(fā)光，便于反復(fù)曝光操作。與其他 ecl 化學(xué)發(fā)光底物相比，可顯著減少樣本及一抗和二抗的使用量。
二、原理：
極敏型ecl化學(xué)發(fā)光底物試劑盒用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（hrp）的抗體、抗原或者核酸。蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以hrp標(biāo)記的抗體或探針結(jié)合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本產(chǎn)品配制的ecl工作液中，室溫孵育數(shù)分鐘，hrp使工作液中的魯米諾（luminol）氧化并發(fā)光，試劑中添加的增強(qiáng)配方可以使這種發(fā)光得到極大增強(qiáng)，從而能夠檢測更低表達(dá)量的蛋白質(zhì)或核酸。此光經(jīng)x光膠片或者電子裝置感光記錄下來，可清晰顯示蛋白質(zhì)或核酸條帶。
三、產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：
低飛克級靈敏度——極高的靈敏度，能快速檢測更廣泛的蛋白范圍，可檢測低飛克級乃至飛克以下的蛋白量。
信號穩(wěn)定——發(fā)光時間較長，能進(jìn)行多次曝光，半小時以后仍可維持75%的發(fā)光。
信號強(qiáng)——發(fā)光信號比對碘苯酚增強(qiáng)的 hrp-魯米諾檢測體系得到極大增強(qiáng)。
穩(wěn)定性較高——試劑盒可在4度穩(wěn)定存放一年。
節(jié)約抗體——需要更少（稀釋更多）的一抗和二抗，特別節(jié)省抗體(建議用量：一抗0.01-0.2 μg/ml，二抗2-10 ng/ml)。
四、使用方法：
1. 印跡膜制備：執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、hrp標(biāo)記的抗體或者h(yuǎn)rp標(biāo)記的核酸探針孵育、洗膜；ecl工作液含有hrp催化的發(fā)光底物，檢測系統(tǒng)必須基于hrp酶標(biāo)記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。
2. ecl工作液的配置：在使用前取等量a液和b液，充分混勻后盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。
3.蛋白或核酸信號顯現(xiàn)：
1). 用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜完全干燥；
2). 將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡；
3). 用電子裝置感光，或在暗室中用x光片曝光；
4). 根據(jù)信號強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時間，也可選擇不同時間多次曝光，以取得更佳效果。
五、安全性：
無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸，請立刻用大量清水沖洗。
六、注意事項：
1．由于不同品牌的抗體質(zhì)量不同，以及抗體的保存條件和保存時間的不同，初次使用時建議對抗體用量進(jìn)行優(yōu)化，以取得更優(yōu)效果。
2．勿將ecl化學(xué)發(fā)光底物試劑盒暴露在陽光或強(qiáng)光下，否則易導(dǎo)致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長時間暴露在陽光下，實驗室光照對試劑盒影響不大；除了x光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。
3．使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤狀態(tài)；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產(chǎn)生。
4．使用前配制ecl工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取a液和b液時一定要用不同的槍頭，互相污染可能導(dǎo)致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過的混合試劑。
5．印跡膜與ecl工作液孵育后約3 min時發(fā)出的熒光更強(qiáng)，隨后熒光會隨著時間的延長而緩慢減弱，至30 min仍可保持約75%的光信號；蛋白點(diǎn)熒光較弱時可以適當(dāng)延長曝光時間；使用過少的ecl工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低ecl工作液使用比例。
6．使用生物素/親和素體系時，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因為脫脂奶粉中含有多種內(nèi)源性生物素，容易產(chǎn)生非特異性信號。
7. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8. 金屬氧化物顆?？赡軙斐赡ど铣霈F(xiàn)顆粒狀斑點(diǎn)，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。